You Position: Home > Paper

Design and synthesis of efficient bcl-2 siRNA and it's interference role to HL-60 cells in leukemia

( views:307, downloads:0 )
Author:
No author available
Journal Title:
JOURNAL OF LEUKEMIA & LYMPHOMA
Issue:
5
DOI:
10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2006.05.002
Key Word:
bcl-2 siRNA;HL-60bcl-2;基因表达

Abstract: 目的 应用RNA干扰技术研究bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用.方法 扫描bcl-2 mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点.GC含量控制在30%~65%之间.由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列.由体外转录合成法合成双链bcl-2 siRNA,将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞.收集转染48 h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测.从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2 siRNA对细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用.结果 收集转染48 h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2 siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象.而转染GAPDH siRNA组的细胞对bcl-2表达无影响.结论 采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2 siRNA可通过降低bcl-2 mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达.

WanfangData CO.,Ltd All Rights Reserved
About WanfangData | Contact US
Healthcare Department, Fuxing Road NO.15, Haidian District Beijing, 100038 P.R.China
Tel:+86-010-58882616 Fax:+86-010-58882615 Email:yiyao@wanfangdata.com.cn