Abstract： @@ 通过对致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达和GATA3活性的观察，探讨雷公藤内酯醇（TP）对IL-5基因转录水平的调节机制，并与地塞米松（DM）的作用比较。 材料与方法（1）动物模型建立及分组：BALB/c小鼠24只，随机平均分为4组：正常对照组，以生理盐水代替卵蛋白（OVA）致敏和激发；致敏组，以OVA致敏和激发［1］；TP组，每次激发前1 h腹腔注射TP 40 μg/kg体重；DM组，每次激发前1 h腹腔注射DM 10 mg/kg体重。TP组与DM组最后一次激发后24 h再给药1次。（2）原位杂交（ISH）：制备脾脏T细胞涂片。IL-5寡核苷酸探针序列：5′TCT CAA AGA ACC ACA TTA CTT GTG GCT CAC 3′。随机观察200个细胞，计数杂交阳性T细胞数。（3）凝胶电泳迁移率实验（EMSA）：BALB/c小鼠30只，随机分为正常对照组（5只）和致敏组（25只），致敏方法同上。Panning法［2］分离CD+4T细胞，用丝裂霉素C处理的B细胞作为抗原呈递细胞（APCs）。将CD+4T细胞分为4组：A组：正常对照组，即正常小鼠CD+4T细胞；另3组分别为将致敏小鼠CD+4T细胞随机分成的B组：刀豆蛋白A(ConA)刺激组，C组：TP组和D组：DM组。各组加入OVA至终浓度0.2 g/L、ConA至终浓度25 mg/L、1×107个APCs，相应组加入TP至终浓度10-4mol/L，DM至终浓度10-5mol/L。B组取0.5 h、1 h、2 h和4 h时相点，其余组取2 h时相点。GATA3寡核苷酸序列：P1 5′CCT CTA TCT GAT TGT TAG CA，P2 5′ TGC TAA CAA TCA GAT AGA GG，末端标记［γ-32P］ ATP。EMSA反应产物经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳3 h，-70℃放射自显影8 h。相同实验重复3次。（4）凝胶电泳迁移率竞争实验：特异性竞争抑制实验组：加入100倍和200倍未标记GATA3探针；非特异性竞争抑制实验组：加入200倍非特异性的其它未标记探针序列：P1 5′ATA AAA TTT TCC AAT GTA AA，P2 5′TTT ACA TTG GAA AAT TTT AT。