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Reversal of adriamycin resistance by digoxin in human breast cancer cell line MCF-7/adriamycin and its mechanism

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Author:
No author available
Journal Title:
Acta Physiologica Sinica
Issue:
6
DOI:
10.13294/j.aps.2015.0075
Key Word:
地高辛;MCF-7/ADR细胞;缺氧诱导因子-1α;多药耐药基因1;细胞凋亡;digoxin;MCF-7/ADR;hypoxia inducible factor-1α;multidrug resistance gene 1;apoptosis

Abstract: 本研究旨在探究地高辛对乳腺癌MCF-7/阿霉素(ADR)细胞耐药性的影响,并探讨其分子机制.将正常培养的MCF-7和MCF-7/ADR细胞分别设为对照组和ADR组;经地高辛(100 nmol/L)处理48 h后的MCF-7/ADR细胞为ADR+ digoxin组;用shRNA技术沉默HIF-1a基因的MCF-7/ADR细胞为shHIF-1α组,并设置对照组为shcontrol组.采用CCK-8法检测ADR的细胞毒作用,以测定IC50与耐药指数;用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)和多药耐药基因1(multidrug resistance-1,MDR1)的mRNA水平;用Western blot方法检测HIF-1α和MDR1蛋白的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示,ADR组细胞对ADR的耐药指数高达115.6,地高辛使其耐药指数下降至47.2 (P< 0.05);ADR组细胞中HIF-1α与MDR1的mRNA和蛋白水平均高于对照组细胞(均P< 0.05),而地高辛可显著降低ADR组细胞HIF-1α与MDR1的蛋白水平,以及MDR1的mRNA水平(P<0.05),但对HIF-1α的mRNA水平无明显影响;经shRNA干扰HIF-1a基因表达后,HIF-1α和MDR1的蛋白水平均显著降低(P<0.05);沉默HIF-1a基因能显著增强ADR对ADR组细胞的促凋亡作用(P<0.05).地高辛可有效地诱导shcontrol组和shHIF-1α组细胞凋亡(P<0.05),但二组之间无显著差异.以上结果提示,地高辛可通过下调HIF-1α蛋白表达从而在转录水平抑制MDR1的表达,也可通过不依赖HIF-1α的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,进而在一定程度上逆转MCF-7/ADR细胞的耐药性.

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