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Prokaryotic expression and purification of retinoic acid induced 16 interacting with Tec kinase domain

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Author:
No author available
Journal Title:
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
Issue:
12
DOI:
10.3969/j.issn.1009-3079.2008.12.017
Key Word:
Tec蛋白;视黄酸诱导蛋白16;核苷酸;蛋白质结构

Abstract: 目的:利用原核表达系统构建Tec激酶区作用蛋白RAI16的融合蛋白表达载体,并进行表达条件的优化和初步纯化.方法:设计基因拼接引物,合成RAl16 cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的RAI16基因与pGEX4T-2载体相连接、转化、筛选.将鉴定阳性的重组子质粒转人大肠杆菌BL-21表达茵中,采用SDS-PAGE电泳分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白的表达.结果:成功构建RAl16蛋白原核表达栽体.采用0.4 mm01/L IPTG、30℃诱导4 h,获得较高表达目的蛋白.融合蛋白主要以包涵体形式表达,将包涵体进行尿素法变性复性和亲和层析柱处理后,获得可溶的高纯度GST-多肽融合蛋白.结论:Tec激酶区作用蛋白RAl16融合蛋白表达的载体和纯化.是制备RAl16多抗以及进一步验证与Tec体外结合作用实验的基础.

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