Abstract: 目的:采用基因工程技术大量表达、提纯幽门螺杆菌(H pylori)细胞空泡毒素毒性片段,和黏附素片段的融合蛋白,以此为抗原,制备高效价的抗VacA-HpaA蛋黄抗体(IgY).方法:大量培养重组菌pQE30-VacA-HpaA-DH5α,诱导表达获得融合蛋白VacA-HpaA,Ni2+-NTA树脂纯化.将纯化的重组蛋白免疫鸡,水稀释法提取IgY,硫酸铵沉淀法纯化浓缩VacA-HpaA IgY.ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot检测其分别对VacA和HpaA抗原的特异性,ELISA法检测效价.结果:重组蛋白主要以包涵体形式表达,免疫鸡后提取的IgY可与该蛋白发生免疫反应,IgY效价总体上随免疫时间增加而升高.经纯化、浓缩后,获得纯度为60%左右,效价为1:12 800的VacA-HpaA IgY,蛋白浓度为22 g/L,Western blot显示在Mr27 000和Mr30 000处分别有相应条带,ELISA检测与VacA和HpaA反应的效价分别为1∶3200和1∶6400(P<0.01).结论:成功制备了高浓度、高效价的抗重组VacA-HpaA的特异性IgY.