Abstract： 目的 研究多药耐药基因(mdr1)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药性.方法 以mdr1 mRNA第79～99和GSTπmRNA第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的siRNA,克隆入pSilence2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ,脂质体介导下转染K562/A02细胞.用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测多柔比星的半数抑制浓度(IC50).结果 经酶切、测序分析表明,成功构建siRNA真核表达载体.经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞株mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,从(2.8±1.65)×108拷贝/μg RNA下降至(3.9±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπmRNA表达量较显示空载体pSilence2.1-U6转染组下降了39.8%,从(2.3±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.4±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜0.01);流式细胞仪显示空载体pSilence2.1-U6转染组细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组细胞凋亡率为(44.98±11.27)%(P＜0.01);空载体转染组耐药指数为23,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组耐药指数降低为7,IC50值从转染前的(1.16±0.38)mmol/ml下降为(0.33±0.04)mmol/ml(P＜0.01).结论 siRNA真核表达载体pSilence-mdr1、pSilence-GSTπ对K562/A02细胞株多药耐药性具有明显的下调作用.