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Construction and expression of the eukaryotic expression plasmid containing two subunits of rat interleukin 12 gene

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Author:
No author available
Journal Title:
CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE
Issue:
7
DOI:
10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2007.07.002
Key Word:
白细胞介素12;质粒;神经胶质瘤;9L细胞

Abstract: 目的 构建双亚基共表达的大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒.方法 用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35两个亚基的Cdna,依次克隆人pcDNA3.1(-)/myc-His A质粒中,以脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12.用电转染法将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-PCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达.结果 所得rp40cDNA序列与GenBank NM022611和AF133197、rp35 Cdna序列与GenBank NM053390和AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.质粒转染9L细胞,获得9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量达139.0~162.1 PG/Ml,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达阳性.结论 成功构建并鉴定了大鼠IL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12.

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