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Cloning of Phytase Gene from Coriolus versicolor by TAIL-PCR and RT-PCR
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- Author:
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- Journal Title:
- CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
- Issue:
- 5
- DOI:
- 10.3321/j.issn:1006-687X.2006.05.005
- Key Word:
- 云芝;植酸酶;TAIL-PCR;RT-PCR
Abstract： 从采绒革盖菌(Coriolus versicolor,常被称为杂色云芝)中筛选到产植酸酶基因.根据植酸酶基因的保守序列设计引物P1、P2,从云芝中分离克隆植酸酶基因的片段.再在分离到的已知序列的5'端和3'端设计嵌套的特异引物SP1、SP2、SP3和SP1'、SP2'、SP3',利用TAIL-PCR技术进行分离已知序列的侧翼序列.结合Blastn、ORF和Primer 5.0软件,在侧翼序列上设计特异引物P3、P4,最终从云芝中分离克隆到全长的植酸酶基因B4.再在B4序列的基础上设计引物phyP rt1、phyP rt2,利用这两个引物通过RT-PCR技术从云芝中克隆到全长的植酸酶基因B5.通过分析,分离克隆到的植酸酶基因可能是新的基因.图4参12
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