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Construction of vector of Cystatin M,Cathepsin B gene coexpression and sequence analysis

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Author:: No author available

Journal Title:: JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY

Issue:: 10

DOI:: 10.3321/j.issn:1000-2790.2009.10.005

Key Word:: 半胱氨酸蛋白酶抑制剂;组织蛋白酶B;基因表达调控;基因;DNA,重组;遗传载体

Abstract：目的:构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂M(Cystatin M,CST6),反义组织蛋白酶B(CB)单/双基因共表达载体.方法:从人胎盘组织中用TRIzol试剂提取总RNA,巢式PCR扩增人Cystatin M基因全长cDNA片段,RT-PCR扩增CB基因cDNA片段.将扩增的Cystatin M插入到真核表达载体pBudCE4.1的Hind Ⅲ位点上,将CB插入到带有及不带Cystatin M基因真核表达载体pBudCE4.1的Xho I位点上.构建pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB单基因表达载体及pBudCE4.1/CST6-CB双基因共表达载体.利用PCR、酶切分析和序列测定方法进一步验证所构建质粒的准确性.结果:人CST6,CB的RT-PCR扩增产物片段大小分别为447,257bp.对pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB进行测序分析证实CST6,CB序列均正确,酶切鉴定及PCR结果显示,CST6,CB的大小分别为447,257 bp且已克隆至pBudCE4.1中.结论:成功构建了pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB表达载体,为深入探讨2种基因在肿瘤侵袭中的生物学作用机制奠定了基础.

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