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Construction and identification of a recombinant lentiviral vector of RNA interference of mesothelin gene
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- Author:
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- Journal Title:
- JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
- Issue:
- 24
- DOI:
- 10.3321/j.issn:1000-2790.2007.24.003
- Key Word:
- 间皮素;慢病毒属;RNA干扰;卵巢肿瘤;细胞粘附
Abstract： 目的:针对间皮素(MSLN)构建RNAi重组慢病毒质粒并用慢病毒包装,探讨MSLN功能.方法:根据MSLN基因信息,用慢病毒质粒载体pRNAT-U6.2/Lenti构建了三个携带小干扰序列和一个阴性对照序列的重组质粒,转染OVCAR-3细胞后,检测RNA干扰效率,选择干扰效率高的质粒载体进行慢病毒包装,并检测病毒滴度,用慢病毒感染细胞再次检测RNA干扰效率和对细胞粘附功能的影响.结果:测序结果证明四种质粒载体的插入序列完全正确.脂质体转染重组慢病毒质粒pRNAT-siRNA3的RNA干扰效率最高,为67.5%.鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度为1×108ifu/mL.pRNAT-siRNA3慢病毒感染细胞的mRNA干扰效率为78%,pRNAT-siRNA3慢病毒干扰组细胞粘附率为(15.1±1.3)%明显低于阴性对照组(33.4±8.2)%和空白对照组(30.0±5.8)%,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:pRNAT-siR-NA3慢病毒的感染能显著抑制OVCAR-3细胞MSLN表达以及粘附能力.MSLN RNAi重组慢病毒质粒载体的制备成功为进一步研究MSLN功能和用慢病毒进行基因治疗建立了一个良好的平台.
- [1]滕丽萍,胡静静,袁庆新,等.大鼠胚胎发育后期胰腺中Mesothelin的表达[J].2005,(17).
- [2]吴小华,王小玲,张立芳,等.卵巢上皮性肿瘤组织中间皮素和CA125表达及其相关性研究[J].2005,(10).
- [3]Karen Yang,Amartya Basu,David Filpula.Releasable PEGylation of Mesothelin Targeted Immunotoxin SS1P Achieves Single Dosage Complete Regression of a Human Carcinoma in Mice[J].2007,18(3).
- [4]McManus MT,Scott ML,Kwiatkowski AV,etc.A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference.[J].2003,33(3).