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Transfection of enhanced green fluorescent protein into immortalized neural progenitor cells by non-viral vectors
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- Author:
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- Journal Title:
- JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
- Issue:
- 7
- DOI:
- 10.3321/j.issn:1000-2790.2007.07.004
- Key Word:
- 绿色荧光蛋白质类;基因表达;转染;神经前体细胞
Abstract： 目的:寻找能高效转染永生化神经前体细胞(INPC)的非病毒载体,观察转染后增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.方法:用阳离子脂质体Lipofectamine 2000,TRANSfection或阳离子聚合物Sofast分别负载质粒EGFP-C1转染INPC,利用荧光显微镜检测转染后24 h的转染效率.对转染效率最高的一种载体,观察其转染后12,24,48和72 h转染效率,确定EGFP表达最高峰.用台盼蓝排斥试验检测转染和未转染细胞的活力.质粒EGFP-C1转染INPC后,经G418筛选,挑选细胞克隆,命名为INPC/EGFP,观察其EGFP阳性率.应用巢蛋白抗体鉴定INPC/EGFP.50 mL/L胎牛血清诱导INPC/EGFP分化,观察分化后细胞的形态及EGFP表达.结果:Lipofectamine 2000,TRANSfection和Sofast转染INPC后24 h,转染效率分别为(25.5±2.9)%,(4.0±1.7)%,(7.9±1.4)%.Lipofectamine 2000的转染效率最高.其转染后12,24,48和72 h的转染效率分别为(17.1±0.7)%,(25.5±2.9)%,(19.4±0.9)%,(15.6±1.4)%,EGFP在转染后24 h表达最高.INPC/EGFP中,EGFP阳性率约为95%.INPC/EGFP巢蛋白表达阳性,其分化后呈神经元或星形胶质细胞样,且胞体及突起中仍可见绿色荧光.结论:Lipofectamine 2000可高效转染INPC.EGFP是INPC理想的示踪方法之一.
- [1]高峰,田玉科,杨辉,等.增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达[J].2006,(3).
- [2]李美山,张成,陈松林,等.绿色荧光蛋白和成肌调节因子在骨髓基质干细胞中的共表达[J].2006,(9).
- [3]高峰,田玉科,杨辉,等.猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建[J].2005,(8).
- [4]Ewert K,Ahmad A,Evans HM,etc.Cationic lipid-DNA complexes for non-viral gene therapy: relating supramolecular structures to cellular pathways.[J].2005,5(1).
- [5]Hennink WE,De Smedt-SC,Demeester J.Cationic polymer based gene delivery systems.[J].2000,17(2).
- [6]R, Heim,A B, Cubitt,R Y, Tsien.Improved green fluorescence.[J].1995,373(6516).