Abstract: 目的:构建并筛选有效的、编码2条shRNA的乙酰肝素酶(Hpa)特异性基因真核表达载体. 方法:分别设计、化学合成6对寡核苷酸单链,经退火、连接和磷酸化后得到Hpa-shRNA双链,将两两随机间隔4~8个碱基后定向克隆入带有各自的U6启动子和终止码、共同的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, EGFP)基因和Neo基因的pGenesil-1中,构建3 条含两段Hpa基因shRNA的pGenesil-1-Hpa-shRNA真核表达载体,转染卵巢癌细胞株SKOV3,流式细胞仪和荧光显微镜下观察转染效率,免疫组化分析Hpa蛋白表达. 结果:酶切与测序证实pGenesil-1-HPSE-shRNA构建成功,无任何碱基突变,3组质粒转染细胞均有Hpa表达的变化,3种不同shRNA质粒转染细胞后Hpa蛋白表达有明显差别. 结论: 构建并筛选了针对Hpa特异性的双基因shRNA真核表达载体pGenesil-1-Hpa-shRNA.