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Establishment and application of a cell model for screening neutralizing monoclonal antibody against human TNF

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Author:
No author available
Journal Title:
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
Issue:
9
DOI:
10.3321/j.issn:1000-2790.2005.09.004
Key Word:
肿瘤坏死因子;单克隆抗体;中和活性;细胞模型

Abstract: 目的:建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF) mAb细胞模型,并从一组抗人TNF mAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb. 方法:用含100 mL/L FCS的DMEM细胞培养液将L929细胞的浓度调整到1×108/L,按每孔100 μL,加入至96孔细胞培养板中,培养过夜. 弃细胞培养上清后,将200 μL的实验液转入培养板中,继续培养16 h. 活细胞用结晶紫染色,脱色后,于570 nm波长测定A值. 结果:浓度在0.3~0.5 mg/L范围内的放线菌素D(antinomycin D, ActD)对L929细胞的生长抑制作用比较稳定;TNF的浓度高于20 kU/L时, 能够使95%以上的实验细胞发生凋亡; 浓度在12.5~50.0 μg/L范围的mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系; 在ActD, TNF和mAb的浓度分别为0.35 mg/L, 20 kU/L和25.0 μg/L的条件下,发现D2的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P>0.05),但高于阴性对照抗体,E6,D12,E11 (P<0.01). 与阴性对照抗体比较,E6, E11也具有一定的中和活性(P<0.05),而D12无中和活性(P>0.05). 结论:本研究建立的mAb抑制TNF诱导L929细胞凋亡的细胞模型可用于筛选中和活性抗TNF mAb;D2的中和活性相对较高,可作为构建治疗性嵌合抗体的制剂.

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