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Inhibition of eosinophil chemotaxin by mutant of macrophage inflammatory protein 4

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Author:
No author available
Journal Title:
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
Issue:
6
DOI:
10.3321/j.issn:1000-2790.2003.06.005
Key Word:
趋化因子;嗜酸粒细胞;基因表达;遗传载体

Abstract: 目的: 为研究MIP4(巨噬细胞炎性蛋白4)的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性,构建MIP4突变体(Met-MIP4)并进行原核表达和纯化,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用. 方法: 将Met-MIP4基因片段插入到pRSET-A融合表达载体中.诱导表达后,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化.采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞,利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性.结果: 构建入融合表达载体pRSET A的基因在大肠杆菌中得到表达.裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占80%,经镍螯合亲和层析纯化后纯度达87%.分离的嗜酸粒细胞纯度达到90%.拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明,纯化的Met-MIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用.结论: Met-MIP4突变体基因在pRSET A融合表达载体中获得可溶性表达和纯化,生物学活性实验表明融合的pRSET-Met-MIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性, 为进一步开发其临床应用奠定了基础.

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